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          大鼠缺血修饰白蛋白(IMA)Elisa试剂盒作用分析
          点击次数:284 发布时间:2013-04-01

          试剂盒使用说明书点击这里给我发消息

          本试剂盒仅供研究使用。

          检测范围:                                                          96T

          20 U/L -600 U/L

          使用目的:

          本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中缺血修饰白蛋白(IMA)含量

          实验原理

          本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠缺血修饰白蛋白(IMA水平。用纯化的大鼠缺血修饰白蛋白(IMA抗?#28751;?#34987;微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微?#23383;?#20381;次加入缺血修饰白蛋白(IMA再与HRP标记的缺血修饰白蛋白(IMA抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样?#20998;?#30340;缺血修饰白蛋白(IMA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标?#35760;?#32447;计算样品中大鼠缺血修饰白蛋白(IMA浓度。 

          试剂盒组成 

          1

          30倍浓缩洗涤液

          20ml×1

          7

          终止液

          6ml×1

          2

          酶标试剂

          6ml×1

          8

          标准品(1200 U/L

          0.5ml×1

          3

          标包被

          12孔×8

          9

          标准品稀释液

          1.5ml×1

          4

          样品稀释液

          6ml×1

          10

          说明书

          1

          5

          显色剂A

          6ml×1

          11

          封板膜

          2张  

          6

          显色剂B

          6ml×1/

          12

          密封袋

          1

          标本要求 

          1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

          2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3?#31181;?#36771;根过氧化物酶的(HRP)活性。

          大鼠缺血修饰白蛋白(IMA)操作步骤

          1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

          600U/L

          5号标准品

          150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

          300U/L

          4号标准品

          150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

          150U/L

          3号标准品

          150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

          75U/L

          2号标准品

          150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

          37.5U/L

          1号标准品

          150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

          2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包?#35805;?#19978;标准品准确加样50μl待测样品?#23383;?#20808;加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

          3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

          4. 配?#28023;?#23558;30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

          5. 洗涤?#30418;?#24515;揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤?#28023;仓?font face="Times New Roman">30秒后弃去,如此重复5次,?#27597;傘?/font>

          6. ?#29992;福?#27599;孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

          7. 温育:操作同3

          8. 洗涤:操作同5

          9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

          10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

          11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?/font>

          大鼠缺血修饰白蛋白(IMA)操作程序总结:

          计算

            以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;,根据样品的OD?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标?#35760;?#32447;的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,?#27425;?#26679;品的实际浓度。 

          注意事项

          1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包?#35805;?#24320;封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

          2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

          3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui?#27599;?#21046;在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

          4. 请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;,zui好做?#32431;住?#22914;标本中待测物质含?#25239;?#39640;(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释?#21512;?#37322;一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

          5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污?#23613;?/span>

          6.底物请避光保存。

          7.?#32454;?#25353;照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

          8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

          9.本试剂不同批号组分不得混用。

          10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

          大鼠缺血修饰白蛋白(IMA)保存条件及有效期

          1试剂盒保存:2-8

          2.有效期:6个月

           

          上海研盟生物科技有限公司 2008版权所有
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