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          大鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒供应商

          点击次数:1321 发布时间:2013/9/11
          提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 资料大小:
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          资料类型: DOC 浏览次数: 1321
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          大鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒供应商

           

          使用目的:

          本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中核因子kb受体活化因子配体( RANKL含量
          实验原理
          本试剂盒应?#30431;?#25239;体夹心法测定标本中大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL水平。用纯化的大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微?#23383;?#20381;次加入核因子kb受体活化因子配体( RANKL),再与HRP标记的核因子kb受体活化因子配体( RANKL抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的核因子kb受体活化因子配体( RANKL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标?#35760;?#32447;计算样品中大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL浓度。

           

          标本要求

          1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,?#23665;?#26631;本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
          2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3?#31181;?#36771;根过氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步骤
          1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

          800 pmol/L
          5号标准品
          150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
          400 pmol/L
          4号标准品
          150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
          200 pmol/L
          3号标准品
          150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
          100 pmol/L
          2号标准品
          150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
          50 pmol/L
          1号标准品
          150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

          2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包?#35805;?#19978;标准品准确加样50μl,待测样品?#23383;?#20808;加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混?#21462;?/span>
          3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30?#31181;印?span>  
          4.         配?#28023;?#23558;30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
          5.         洗涤?#30418;?#24515;揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤?#28023;仓?0秒后弃去,如此重复5次,?#27597;傘?/span>
          6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
          7.         温育:操作同3。
          8.         洗涤:操作同5。
          9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15?#31181;?
          10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
          11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15?#31181;?#20197;内进?#23567;?/span>

           

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